محیط کشت Triple Sugar Iron Agar
محیط کشت Triple Sugar Iron Agar یک محیط کشت افتراقی چندگانه و بسیار ارزشمند در میکروبیولوژی تشخیصی است. این محیط به طور همزمان توانایی ارگانیسم را در تخمیر سه قند گلوکز لاکتوز و سوکروز و همچنین تولید گاز و سولفید هیدروژن مورد ارزیابی قرار می دهد. طراحی هوشمندانه این محیط امکان افتراق مقدماتی و سریع میان اعضای خانواده انتروباکتریاسه و همچنین باکتریهای گرم منفی رودهزی دیگر را فراهم می نماید. نتایج به دست آمده از کشت در این محیط نقش کلیدی در هدایت مراحل بعدی تشخیص و تأیید نهایی ایفا می کند.
ترکیبات محیط کشت Triple Sugar Iron Agar
این محیط حاوی ترکیبات متعددی است که هر کدام عملکرد خاصی دارند. پایه آگار محیط را فراهم می کند. منابع پروتئینی شامل پپتون و عصاره مخمر مواد مغذی ضروری برای رشد باکتری ها را تأمین می کنند. سه قند کلیدی محیط گلوکز به مقدار یک گرم در لیتر لاکتوز و سوکروز هر کدام به مقدار ده گرم در لیتر هستند. این نسبت بسیار مهم است. فنول رد به عنوان شناساگر pH استفاده می شود و در شرایط اسیدی زرد رنگ می شود. نمک آهن موجود در محیط اغلب فرو سولفات است. سدیم تیوسولفات به عنوان منبع سولفور برای تولید سولفید هیدروژن عمل می کند. حضور کلرید سدیم تعادل اسمزی مناسب را حفظ می کند.
اهمیت موارد مصرف و اهداف تشخیصی محیط کشت Triple Sugar Iron Agar
اهمیت اصلی محیط کشت Triple Sugar Iron Agar در توانایی آن در ارائه اطلاعات اولیه اما حیاتی تنها پس از یک شب انکوباسیون است. این محیط به طور روتین برای بررسی نمونههای مشکوک به عفونتهای رودهای مانند مدفوع و نیز نمونههای گرفته شده از سایر نقاط بدن که احتمال آلودگی با فلور روده وجود دارد استفاده می شود. موارد مصرف آن شامل افتراق اولیه باکتریهای گرم منفی رودهزی به ویژه اعضای خانواده انتروباکتریاسه و نیز باکتریهای گرم منفی غیر تخمیرکننده می باشد. از طریق کشت در این محیط می توان به تشخیص اولیه در مورد الگوی تخمیر قندها تولید گاز از تخمیر و تولید سولفید هیدروژن دست یافت. این اطلاعات مسیر تشخیصی را برای انجام آزمایشات تأییدی بعدی مانند تستهای بیوشیمیایی سریع یا روشهای مولکولی مشخص می کند.
مکانیسم عملکرد محیط کشت Triple Sugar Iron Agar
مکانیسم عملکرد این محیط مبتنی بر واکنشهای بیوشیمیایی مختلف در دو ناحیه محیط است. روش کار بدین صورت است که با یک آنس نوک تیز ابتدا سطح محیط را به صورت خطی کشت می دهند و سپس با فرو بردن همان آنس به کف لوله کشت عمقی نیز انجام می گیرد. پس از انکوباسیون در دمای سی و هفت درجه سلسیوس به مدت هجده تا بیست و چهار ساعت نتایج بر اساس تغییرات رنگ در بخشهای شیب دار و ته لوله و نیز وجود شکستگی یا حباب در آگار تفسیر می شوند.
تفسیر نتایج چند جنبه دارد. تخمیر قندها سبب تولید اسید و تغییر رنگ شناساگر فنول رد به زرد می شود. از آنجا که مقدار گلوکز کم است باکتری هایی که تنها گلوکز را تخمیر می کنند پس از مصرف آن در ابتدا ته لوله را اسیدی و زرد رنگ می کنند اما سپس با استفاده از مواد پروتئینی و تولید محصولات قلیایی در ناحیه شیب دار آن را قرمز رنگ می نمایند. این الگوی قرمز روی شیب و زرد در ته لوله نشان دهنده تخمیر گلوکز به تنهایی است. اگر باکتری توانایی تخمیر لاکتوز یا سوکروز را نیز داشته باشد مقدار زیاد این قندها در محیط باعث می شود اسیدیته در کل لوله باقی بماند و نتیجه به صورت زرد شدن همزمان شیب و ته لوله مشاهده گردد. عدم تخمیر هیچ یک از قندها منجر به قرمز ماندن تمام محیط یا تغییر رنگ به نارنجی می شود.
تولید گاز از تخمیر با ایجاد حباب یا شکاف در محیط آگار یا جدا شدن کامل آگار از کف لوله مشخص می شود. تولید سولفید هیدروژن نیز زمانی رخ می دهد که باکتری بتواند سدیم تیوسولفات را احیا کند. سولفید هیدروژن تولید شده با نمک آهن واکنش داده و رسوب سیاه رنگ فرو سولفید ایجاد می نماید که این رسوب اغلب در ته لوله دیده می شود.
کاربرد در افتراق باکتریها درمحیط کشت Triple Sugar Iron Agar
این مکانیسمها امکان افتراق طیف وسیعی از باکتریها را فراهم می کند. به عنوان مثال سالمونلا تیفی تنها گلوکز را تخمیر می کند و گاز تولید نمی نماید اما سولفید هیدروژن مثبت است. بسیاری از سویه های شیگلا قندها را بدون تولید گاز یا سولفید هیدروژن تخمیر می کنند. اشرشیا کلی به طور معمول هر سه قند را با تولید گاز تخمیر می کند اما سولفید هیدروژن تولید نمی نماید. پروتئوس میرابیلیس اغلب سولفید هیدروژن مثبت است و گلوکز را با تولید گاز تخمیر می کند اما لاکتوز را تخمیر نمی کند. باکتری های غیر تخمیرکننده مانند سودوموناس آئروژینوزا معمولاً هیچ یک از قندها را تخمیر نکرده و محیط را قلیایی می کنند که باعث قرمز یا بنفش شدن کل محیط می شود.
ملاحظات کاربردی محیط کشت Triple Sugar Iron Agar
باید نکات کلیدی را در استفاده از این محیط رعایت کند. لوله های محیط باید تازه آماده شده یا به درستی نگهداری شده باشند تا از خشک شدن یا تغییر کیفیت آنها جلوگیری شود. کشت عمقی و سطحی باید به درستی انجام گیرد. زمان انکوباسیون باید دقیق باشد زیرا خوانش نتایج پس از بیست و چهار ساعت ممکن است به دلیل تجزیه پروتئین ها و ایجاد قلیائیت ثانویه گمراه کننده باشد. تفسیر رنگ نارنجی میانی نیاز به دقت دارد و گاهی به عنوان نتیجه منفی در نظر گرفته می شود. باید به خاطر داشت که برخی باکتری ها ممکن است الگوهای غیرمعمول نشان دهند و نتایج این محیط مقدماتی است و همواره نیاز به تأیید با روش های تکمیلی دارد. کنترل کیفیت محیط با استفاده از ارگانیسم های مرجع مانند اشرشیا کلی برای الگوی زرد روی شیب و ته لوله با تولید گاز پروتئوس میرابیلیس برای الگوی قرمز روی شیب و زرد در ته با تولید سولفید هیدروژن و سودوموناس آئروژینوزا برای الگوی قرمز در کل محیط توصیه می شود. در نهایت محیط کشت Triple Sugar Iron Agar به عنوان یک ابزار قدرتمند و اقتصادی در آزمایشگاه میکروبیولوژی تشخیصی با ارائه نتایج سریع و اطلاعات ارزشمند نقش غیرقابل انکاری در فرآیند تشخیص عفونتها ایفا می نماید.
بدون دیدگاه